小红教你如何分离酵母ヽ(･∀･)ﾉ

经过几天的培养，瓶底出现明显沉淀物。



今天的事情就是涂平板。

涂平板的意义是不同菌种的分离。
到这一步为止我们只是富集，就是把原来蜂蜜里的所有菌种都在数量上增加了很多倍，不仅仅是酵母菌，这时涂出来的平板上肯定会长出很多看上去就不一样菌落，把其中的酵母单菌落挑出来，这就是分离。

还有一种涂平板是【三区划线】
我没找到标准的图片就随手画了一张
↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓画好差不多就是这样↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓

很明显能分出三个区域，从密到舒。
要注意的就是一笔划完，不要来回划


固体转固体用三区划线，比如试管转平板
液体转固体就直接涂平板就行了，就是把液体滴在平板上然后涂均匀







一瓶中蜂蜜液体培养基，一瓶意蜂蜜液体培养基，一瓶无菌水，一个胶头滴管，一个涂布棒，4个平板（每个做两个平行）

学习        

今天的内容就是把旧的培养液取20ml转入新的培养液。
因为经过6天的发酵，旧的培养液中的营养已经几乎消耗完了，继续下去菌的数量会急剧减少，活性也会大大降低。


这是今天的旧培养液的情况，其中3瓶有很明显的浑浊，而【中1】瓶有很明显的菌膜，吸取培养液的过程中我发现【中2】瓶中也有少数菌膜，【意1】【意2】中则没有，这起码说明中蜂蜜中菌种的成分跟意蜂蜜是有区别的。

越是好氧菌越容易形成菌膜，越是厌氧菌越容易形成沉淀，中性一些的或是兼型厌氧菌，则沉淀、菌膜、浑浊都有可能。
酵母是兼型厌氧。




这是液面的菌膜





后面4瓶是旧的，前面4瓶是新转入的新鲜的培养液。
旁边8个平板，是用旧的4个培养液涂的，每个样品分别有2个平行。

我有现成的酵母培养用培养基哦

雨中漫步 发表于 2014-6-10 21:01
我有现成的酵母培养用培养基哦

哦哦，叫什么？

昨天转的4瓶培养液，经过一天的培养，跟旧的4瓶已经有点像了。



涂的8个平板如下图。（放大清晰图在最下）

上面一排是意蜂蜜的
下面一排是中蜂蜜的

虽然意蜂蜜的板子有点脏（因为试验做到一半胶头滴管的胶头坏了，我只能直接倒培养基，所以板子看上去有点脏乱），但是起码是相对理想的，菌落正反面都是乳白色，边缘光滑，湿润，粘稠，这些都符合酵母菌的菌落特征，虽然我对在平均温度不到30℃的条件下，24h都不要就能长起来的菌可能是酵母菌这件事存有疑虑，不过这可以交给生物科技公司去判断，我能做的也只到这里了。

中蜂蜜的板子实在是太 干 净 了，什么都没有，唯一长的几个单菌落，菌落干燥，有菌丝，虽然不能肯定是什么菌，反正肯定不是酵母菌。一个没有经过选择的样品的板子不应该这么干净……不好轻易下结论，中蜂蜜的我决定再做一遍。

4号转接的第一批培养液，今天已经可以倒掉了，倒掉之前做最后一次记录观察。




被较厚的白色菌膜明显覆盖，表面干燥，有菌丝，正反面颜色不一致，反面近似青色，无沉淀，无混浊。


培养液中有大量絮状菌丝团。可以辨认出有两种菌所形成的小块菌膜，一种是白色，另一种中间青四周白。沉淀较少。


意蜂蜜的两瓶几乎一样。
溶液混浊，白色沉淀。



观察10号涂的平板


跟昨天比只是长的更多了。



10号，从4号的培养液中转的4瓶新培养液，几乎复制了旧4瓶的生长过程，就不多说了。



今天主要是做下面的试验准备。

     

1200ml液体PDA，600ml固体PDA，16个平板，14个斜面。
起码能用好一段时间了。




等这批培养液长好应该就可以拿出去测序，联系生物科技公司的过程中，我发现现在很多公司是不接受活菌的，他们愿意从DNA往下做，而从活菌中提取DNA的过程好几家都表示不能做。这个其实我有点奇怪，因为提取DNA并不复杂，就做几个离心就行了，试剂盒也就一百多块钱，如果我们公司以后准备批量做的话，也许我还会打个申请买点移液枪回来自己做，但是现在来看我们可能就做个一次两次，就不太划算…………加上这步，价钱贵了二百多块钱……这钱真是太好赚了……

学习了，虽然许多不懂，毕竟自己完全外行，借用网络语言，楼主的试验让我感觉不明觉厉

npdl 发表于 2014-6-12 23:23
学习了，虽然许多不懂，毕竟自己完全外行，借用网络语言，楼主的试验让我感觉不明觉厉

你对菌类和昆虫的识别能力也让我觉得超厉害啊……

小红 发表于 2014-6-13 08:35
你对菌类和昆虫的识别能力也让我觉得超厉害啊……

认真学习了下，很不错@！楼主的实验很有范儿、实验记录更有范儿，赞一个！！