2014年拟立项的蜂产品国家标准

                               
1、项目名称：蜂胶中杨树胶的检测方法-高效液相色谱法       
     起草单位：浙江大学
     目的意义：以HPLC技术测定杨树胶标志性成分-水杨苷来区分蜂胶与杨树胶的方法对市场上的蜂胶进行检测，其阳性率显著下降。很可能是不法商贩利用化学手段将水杨苷破坏，以达到以杨树胶冒充蜂胶的目的继续牟利。经过研究，我们已鉴定出另一个可用于区分蜂胶与杨树胶的特征性成分CCP为邻苯二酚，以水杨苷和邻苯二酚为指标成分，旨在建立一种有效鉴别蜂胶中是否存在杨树胶的方法，弥补现行蜂胶标准的不足。       
范围和主要技术内容：本标准规定了反相高效液相色谱法测定蜂胶中水杨苷和邻苯二酚的方法。酚苷是杨属植物的特征性成分，而水杨苷是酚苷的基本结构单元，在所有研究过的杨属植物的皮、叶、花，芽中均有分布，水杨苷在甲醇、弱酸性、弱碱性及中性介质中均稳定存在，因此，在杨树胶中均能检测到水杨苷存在。邻苯二酚在所研究的杨属植物的芽、叶、花、皮中均有分布。其物理性质极其稳定，可在甲醇、酸性、碱性以及中性介质中均能稳定存在。而且对市场样本检测发现，水杨苷被水解掉的样品中仍能检测到邻苯二酚的存在。水杨苷和邻苯二酚均有商品化的标准品可购买，价格便宜。因此，本标准以水杨苷和邻苯二酚为指标，采用反相高效液相色谱法鉴别蜂胶中是否含有水杨苷和邻苯二酚，以确定蜂胶中是否含有杨树胶。
2        项目名称：蜂花粉生产技术规范       
起草单位：浙江省缙云县绿纯养蜂专业合作社、杭州天厨蜜源保健品有限公司、浙江大学动物科学学院、山东省东营市蜜蜂研究所、杭州常青蜂业有限公司       
目的意义：蜂花粉是蜂农饲养蜜蜂采集粉源植物生产出来。为保证GB/T30359—2014《蜂花粉》国家标准实施，根据《食品安全法》确保蜂花粉质量安全，制定《蜂花粉生产技术规范》规范蜂农生产经营行为，有利于蜂花粉开发国内外市场。       
范围和主要技术内容：本标准规定了保证蜂花粉质量安全的生产条件、生产过程控制及包装、标志、贮存、运输技术要求。本标准适用于蜂花粉生产。

蜂胶中杨树胶的检测方法
反相高效液相色谱法


范围
本标准规定了蜂胶中是否含有杨树胶的反相高效液相色谱检测方法。
本标准适用于蜂胶原料及蜂胶乙醇提取物中杨树胶的检测。
规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T 6682-2008分析实验室用水规格和试验方法
GB/T 24283-2009蜂胶
术语和定义
下列术语和定义适用于本标准。
3.1
蜂胶 propolis
工蜂采集树脂等植物分泌物与其上颚腺、蜡腺分泌物等混合形成的胶粘性物质。
3.2
蜂胶乙醇提取物 ethanol extracted propolis
乙醇萃取蜂胶后得到的物质。
3.3
杨树胶extractedpopulusbuds, leaves or barks
杨属（Populus）植物的芽、叶子或树皮等组织经人工熬制加工，再经乙醇提取而成的提取物。
3.4
杨树型蜂胶poplar type propolis
杨属（Populus）为主要植物来源的蜂胶。
3.5
邻苯二酚
杨树胶中含有而蜂胶中不含有的特征性成分。
3.6
水杨苷salicin
水杨酸盐类酚苷的基本结构单元，广泛存在于杨属和柳属植物的芽、叶子和树皮中的主要降解产物之一。
4.原理
水杨苷广泛存在于杨属和柳属植物的芽、叶子和树皮中，西方蜜蜂（Apismellifera）在采集杨属植物树脂以及蜂巢内传递这些树脂加工成蜂胶的过程中加入了其腺体分泌的β-葡萄糖苷酶等，将树脂中所含有的水杨苷水解。但是，在杨树胶加工过程中水杨苷能稳定存在。因而水杨苷是区分蜂胶与杨树胶的有效指标。在本标准检测条件下，除了水杨苷外，还发现另一个特征性更强的杨树胶中含有而蜂胶中不含有的特征峰，经鉴定证实为邻苯二酚。因此，可根据水杨苷或邻苯二酚的有无来定性确定蜂胶中是否含有杨树胶。
试样经乙醇提取后，经浓缩、溶解于水后，用配有紫外检测器的反相高效液相色谱仪在213 nm处检测水杨苷和邻苯二酚的有无，从而判断蜂胶中是否含有杨树胶。
5. 试剂和材料
除非另有规定，所有试剂均为分析纯。实验用水应符合GB/T 6682-2008中一级水的规定要求。
5.1 甲醇：色谱纯。
5.2 乙腈：色谱纯。
5.3 乙醇：分析纯。
5.4 磷酸：分析纯。
5.5 水杨苷标准品：纯度≥98%。
5.6 邻苯二酚标准品：纯度≥99%。
5.7 0.5%磷酸（5.4）溶液：量取5 mL 磷酸，用高纯水定容至1L。
5.8 标准贮备液：准确称取水杨苷（5.5）和邻苯二酚标准品（5.6）各10 mg，分别用甲醇溶液（5.1）配制成1.0 mg/mL的标准溶液，于4℃冰箱保存。
5.9 标准工作液：吸取适量1.0mg/ mL的标准贮备液（5.8），用甲醇溶液（5.1）分别稀释成0.005 mg/mL、0.01 mg/mL、0.02 mg/mL、0.04 mg/mL和0.06 mg/mL五个浓度，现用现配。
5.10 滤膜：0.45 μm。
6.仪器和设备
6.1 高效液相色谱仪：配有紫外检测器。
6.2 粉碎机。
6.3 旋转蒸发仪。
6.4 超声波清洗器。
7. 样品的取样及预处理
从被检样品的不同部位均匀取样50 g，冷冻，粉碎，混匀，作为备检样品。
8 试验方法
8.1  供试样品溶液的制备
称取1g蜂胶乙醇提取物试样或2 g蜂胶原料试样，用75%乙醇超声波提取30 min，料液比为1︰15 (W/V)，反复提取3次。合并滤液，离心过滤后旋转蒸发除去乙醇，然后用蒸馏水定容至50 mL，取上清液，0.45 μm滤膜过滤，供液相色谱测定。
8.2  色谱条件
色谱柱：Sepax HP-C18，柱长150 mm，内径4.6 mm，粒度5μm；或性能相当的色谱柱。
流动相流速：1 mL/min。
梯度洗脱，洗脱程序见附录A 表A.1。
检测波长：213 nm。
柱温：30℃。
进样量：5 μL。
8.3  测定
取5μL样品溶液（8.1）、水杨苷和邻苯二酚标准工作液（5.9）（控制标准液浓度与试样溶液中水杨苷的浓度尽量接近）分别进样分析，根据水杨苷的含量和邻苯二酚的有无确定是否存在杨树胶。
水杨苷标准品、邻苯二酚标准品、杨树型蜂胶、杨树胶、掺5%杨树胶的蜂胶原料及掺15%杨树胶的蜂胶乙醇提取物的色谱图参见附录B。
8.4 结果计算
试样中水杨苷或邻苯二酚含量（X）以毫克每克（mg/g）表示，按式（1）计算：
                                        (1)
式中：
CS—水杨苷或邻苯二酚标准溶液的浓度，单位为毫克每毫升（mg/mL）；
V—试样最终定容体积，单位为毫升（mL）；
AS—水杨苷或邻苯二酚标准溶液对应的峰高或峰面积；
A—试样溶液对应的峰高或峰面积；
m—样品质量，单位为克（g）。
将符合重复性要求的两个独立测定值的算术平均值作为测定结果（mg/g），保留两位有效数字。平行试验相对偏差不得超过2.0%。