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色谱柱初始平衡
通常,色谱柱出厂时保存于100%乙睛中。将色谱柱更换至其它流动相体系之前,务必要确保流动相的兼容性。为避免流动相缓冲液在色谱柱或色谱系统中析出,使用五倍柱体积的水/有机溶剂混合溶液冲洗色谱柱,其中有机溶剂含量与所需缓冲盐流动相的有机溶剂含量相同或更低(例如,使用60%的甲醇水溶液冲洗色谱柱和系统,然后再更换为60%甲醇/40%缓冲液的流动相)。当压力达到恒定且色谱柱基线稳定时,可认为该柱达到完全平衡。
色谱柱的清洗及保存
色谱柱峰形发生改变、色谱峰分叉、出现肩峰、保留时间漂移、分离度变化或压力升高,都表明色谱柱被污染,用纯有机溶剂进行冲洗以去除非极性污染物,谨慎操作以避免任何缓冲盐的析出。如果冲洗不能解决问题,可采用以下步骤对色谱柱进行清洗和再生。
使用与样品性质和固定相类型(反相、正相或HILIC)相匹配的常规清洗方法,这有助于溶解可疑污染物。
在柱温45度条件下,使用20倍柱体积的溶剂冲洗色谱柱。
如果使用的是反相色谱柱,依次以非极性逐渐增强的溶剂(如,水到甲醇到四氢吠喃到二氯甲烷)冲洗色谱柱。
通过逆向冲洗程序,再返回初始流动相条件。
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